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一、微生物純培養技（jì）術
微（wēi）生物（wù）在自然界中不僅分布廣，而（ér）且種類（lèi）多，並多是混雜地生活在一起。要想研究或利用某一微生物，必須把混（hún）雜的微生物類群分離開來，以得到隻含一種微生物的純培養。微生物學中將（jiāng）在實驗室條件下（xià）由一個細胞或一種細（xì）胞群繁殖得到的後（hòu）代稱為微生物的純培養。
純培養技術（shù）包括兩個基本（běn）步驟：① 從自然環境中分離（lí）培養（yǎng）對象。② 在以（yǐ）培養對象為唯一生物種類的隔離環境中培養、增殖，獲得這一生物種（zhǒng）類的細胞群體。針對不同微生物的特點，有許多（duō）分離（lí）方（fāng）法。應用最廣的是平板法分離純（chún）培養。
（一）、用固體培養基分離純培養
單個微（wēi）生物在適宜的固體培養基表麵或（huò）內部生（shēng）長、繁殖到一（yī）定程度可以形成肉眼可（kě）見的、有（yǒu）一定形態結構的子細胞生長群體，稱為菌落（colony）。當固體培養基表麵眾多菌落連成一片時，便成為菌（jun1）苔（lawn）。不（bú）同微生物在特定（dìng）培養基（jī）上生長形成的菌落（luò）或菌苔一般都具有穩定的特征，可以成（chéng）為對該微生物進行分類、鑒定的重要依（yī）據。大多數細菌、酵母菌、以及許多真（zhēn）菌和單細（xì）胞（bāo）藻類能在固體培養基上形成孤（gū）立的菌落，采用適宜的平板分離法很容易得到純（chún）培養。所謂（wèi）平板，即培養平板（culture plate）的簡稱，它是指固體培養（yǎng）基倒入無（wú）菌平皿，冷卻凝固後，盛固體培養基的平皿。這方法（fǎ）包括將單（dān）個微生物分離和固定在固體培養基表麵或裏麵。固體培（péi）養基用瓊脂或其它凝膠物質固（gù）化（huà）的培養基，每個孤立的活（huó）微生物體生長、繁殖形成菌落，形成的菌落（luò）便於移植。最常用的分離、培養微（wēi）生物的固體培養基是瓊脂固體培養基平板。這種由Kock建立的采用平板分離微生物純（chún）培養的技術簡便易行（háng），100多年來一直是各種菌種分離的最常用手段。
1. 稀釋倒平板法（pour plate method）
先將待分離的材料（liào）用無菌（jun1）水作一係（xì）列的稀釋（如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......），然後（hòu）分別取不同稀釋液少許，與已熔（róng）化並冷（lěng）卻至（zhì）50℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻後，傾入滅過（guò）菌的培養皿中，待瓊脂凝固後，製成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定（dìng）時間即可出現菌落（luò）。如果稀釋得當，在平板表麵（miàn）或瓊脂培（péi）養基中就可出（chū）現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重複以（yǐ）上操作數次，便可得到純（chún）培養（yǎng）。　
2. 塗布平板法（spread plate method）
由於將含菌材料先加到還較燙（tàng）的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，而且采用（yòng）稀（xī）釋倒平（píng）板法也（yě）會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響（xiǎng）其生長，因此在微生物學研究中（zhōng）更（gèng）常用（yòng）的純種分離方法是塗布平板法。其做法是（shì）先將已熔化的培養（yǎng）基倒入無菌平皿（mǐn），製成（chéng）無菌（jun1）平板，冷卻（què）凝固（gù）後，將（jiāng）一定量的某一稀釋度的樣（yàng）品懸液滴加在平板表麵，再用無菌玻璃塗棒將菌液均勻分散至整個平（píng）板表（biǎo）麵，經培養後挑取單個菌落（圖2-4）。
3. 平板劃線法（streak plate method）
用接種環以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表麵進行平行劃線、扇形劃線或其他（tā）形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次（cì）數的增加而減少，並逐（zhú）步（bù）分散開來，如果劃線適宜的話（huà），微生物能一一分散，經培養（yǎng）後，可在平板表麵得到單菌落。
4. 稀（xī）釋搖管法（dilution shake culture method）
用固體培養基分離（lí）嚴格厭氧菌（jun1）有它特殊的地方。如果該微生物暴露於空氣中不（bú）立即死亡，可以（yǐ）采（cǎi）用（yòng）通常的方法製備平板（bǎn），然後置放在封閉的容器中培養，容器中（zhōng）的氧氣可采用化學、物理或生物的（de）方法清除。對於那（nà）些對氧氣（qì）更為敏感的厭氧性微生物，純培養的分離則（zé）可采用稀釋搖管培養（yǎng）法進行，它是稀釋倒平板法的一種（zhǒng）變（biàn）通形式。先（xiān）將一係列盛無菌瓊脂培養基（jī）的試（shì）管加熱使瓊脂熔化（huà）後冷（lěng）卻並保持在（zài）50℃左（zuǒ）右，將待（dài）分離（lí）的材料用這些試管進行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝後（hòu），在瓊脂柱表麵傾倒一層滅（miè）菌液體石（shí）蠟和固體石蠟的混合物，將（jiāng）培養（yǎng）基和空氣隔開。培養後，菌落形成在瓊脂柱的中間。進行單菌落的挑取（qǔ）和移植，需先用一隻滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取（qǔ）出，再用一隻（zhī）毛（máo）細管插入瓊脂和管（guǎn）壁之間，吹入無菌無氧氣（qì）體，將瓊脂柱吸出，置放在培養皿中，用無菌刀將（jiāng）瓊脂柱切成（chéng）薄片進行觀察（chá）和菌落的移（yí）植。
（二）、用液體培養基分離純培養
對於大（dà）多數細菌和（hé）真菌，用平板法分離通常是滿意的（de），因為它們的大多數種類（lèi）在固體培養基上長得很好。然而迄今為（wéi）止（zhǐ）並不是（shì）所有的微生物都能在（zài）固（gù）體培（péi）養基上生（shēng）長（zhǎng），例如（rú）一些細（xì）胞大的細菌、許多原生動物和藻類（lèi）等，這些微生物仍需要用液體培養基分離來獲得純培養。
通（tōng）常采用的液體培（péi）養基分離純化法是稀釋法。接種物在液體培養基中進行順序稀釋，以得到高度稀釋的效果，使一支試管中分配不到一個微（wēi）生物。如果（guǒ）經稀釋後的大多數（shù）試管中沒有微生物生長，那麽有（yǒu）微生物生長的試管得到的培養物可能就（jiù）是純培養物。如果經稀釋後的試管中有微生物生長的比例（lì）提高了，得到純培（péi）養物的機率就會急劇下（xià）降。因此（cǐ），采用（yòng）稀釋法進行液體分離，必須（xū）在同一個稀（xī）釋度的許多平行試管中（zhōng），大多數（一般應超過95%）表現為不生長。

（三）、單細（xì）胞（孢子（zǐ））分離

稀釋法有一個重要缺點，它隻能分離出混雜微生物群體中占數量優勢的種類，而在自然界，很多微生物（wù）在混雜群體中都是少數。這時（shí），可（kě）以采（cǎi）取顯微分離法從（cóng）混雜群體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養以獲得純培養，稱為單細胞（或單孢（bāo）子）分離法。單細胞分（fèn）離（lí）法的難（nán）度與細胞或個體的大小成反比，較大（dà）的（de）微生物如藻類、原生動物較容（róng）易，個體很小的細菌則（zé）較難。
對於（yú）較大的微（wēi）生物，可采用毛細管提取單（dān）個個體（tǐ），並在大量的滅（miè）菌培養基中轉移清洗（xǐ）幾次，除去較小微生物的汙染。這項操作可在低倍顯（xiǎn）微（wēi）鏡，如解（jiě）剖顯（xiǎn）微鏡下進行（háng）。對於個體相對較小的微生物，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下進行。目（mù）前，市場上有售的顯（xiǎn）微操作儀種類很多，一般是通過機械、空氣或油壓（yā）傳動裝置來減（jiǎn）小手的動（dòng）作幅度，在（zài）顯微鏡下用毛細管或顯微針、鉤、環等挑取單個微生物細胞或孢子以獲得純培養。在沒（méi）有顯微操作儀時，也可采用一些變通的方法在顯微鏡下進行單細胞分離，例如將經適當稀釋（shì）後的樣品製備（bèi）成小液滴在顯微鏡下觀察，選取隻含一個細胞（bāo）的液體來進行純培養物的分離。單細胞（bāo）分離法對操作技術有比較高的要求，多限於高（gāo）度專業（yè）化的科學研究中采用。

（四）、選擇培（péi）養分離

沒有一（yī）種培養基或一（yī）種培（péi）養條件能夠滿足自然界中一切生物生長的要求，在一（yī）定程（chéng）度上所有的（de）培（péi）養基都是選擇（zé）性的。在一種培養基（jī）上接種多（duō）種微生物，隻有能生長的才生長，其（qí）它被抑製（zhì）。如果某種微生物的生長（zhǎng）需（xū）要是已知的，也可以設計一套特定環境使之特（tè）別適（shì）合這種微（wēi）生物的生長，因而能夠從自然界混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養出來，盡管在混雜的微生物群體（tǐ）中這種微生物可能隻占少數。這種通過（guò）選擇培養進行微生物（wù）純培養分離的技術稱（chēng）為選擇培養分（fèn）離，是十分重要的，特別對於從自然界中分離、尋找有用的微生物。在自然界中，除了極特（tè）殊的情（qíng）況外，在大多數場合下微生物群落是由多種微生物組成的，因此，要從（cóng）中分離出（chū）所需（xū）的特定微（wēi）生物是十分困難的，尤其當某一種微生物所存在的數量與其它微生物相比非常少時，單采用一（yī）般的平板稀釋方法幾乎是不可能分離到該種（zhǒng）微生物的。例（lì）如（rú），若某處的土壤中（zhōng）的微生物數（shù）量在10^８時，必須稀釋到10^-6才有可能在平板上分離到單菌落，而（ér）如果所需（xū）的微生物的數量僅為10^２-３，顯然不可能在一般通用的平板上得到該微生物（wù）的單菌落。要分離這種微生物，必須根據該微生物的特點，包括營（yíng）養、生理、生長條件（jiàn）等，采用選擇培養分離的方法。或抑製使大多數微生物不能生長，或（huò）造成有利於該（gāi）菌生長的環境，經過一定時間（jiān）培養後使該菌在群落中的數量上升，再通過平板稀釋等方（fāng）法對它進行純培養分（fèn）離。
1. 利用選擇平板進行直接分離
主要（yào）根據待分離微生物的特點（diǎn）選擇不同的培養條件，有多種方法（fǎ）可以采用。例（lì）如在從土壤中篩選蛋白酶產生菌時，可以（yǐ）在培養基中添加牛奶（nǎi）或酪素製備培養基平板，微生物生長（zhǎng）時若產生蛋（dàn）白酶則會水解牛奶或酪素，在平板上形成（chéng）透明的蛋白質（zhì）水解（jiě）圈。通（tōng）過（guò）菌株培養（yǎng）時產生的蛋白質水解圈對（duì）產酶菌株進行篩選，可以（yǐ）減少工作量，將那些大量的非產蛋（dàn）白酶（méi）菌株淘汰；再如，要分離高溫菌，可在高溫條件進（jìn）行培養；要分離某種抗菌素抗性（xìng）菌株，可在加有抗菌素（sù）的（de）平板上進行分離；有些微生物如螺旋體（tǐ）、粘細菌、藍細菌等能在瓊脂平板表麵或裏麵滑行，可以利（lì）用它們的滑動特點進行分離純化，因為滑行能使它們自己和其（qí）它不能移動的微生物分開。可將微生物群落點種到平板（bǎn）上，讓微生物滑行（háng），從滑行前沿挑取（qǔ）接種物接種，反複進行，得到純培養（yǎng）物。
2. 富集（jí）培養
主要是指利用不同（tóng）微生物間生命活動特點的不同，製定特（tè）定的環境條件，使僅適應於該條件（jiàn）的微生物旺盛生長，從而使其（qí）在群落（luò）中的數量大大增加，人們能夠（gòu）更容易地從（cóng）自然界中分離到（dào）所需的特定微生物。富集條件可根據所需分離的微生物（wù）的特點從物理、化學、生（shēng）物、及綜（zōng）合（hé）多（duō）個方（fāng）麵進行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓（yā）、光照、氧氣、營養等等許（xǔ）多方麵。如采用富集方法從（cóng）土壤中分離能降解（jiě）酚（fēn）類化合（hé）物對羥基苯甲酸的微生物的實驗過程。首先配製（zhì）以對羥基苯（běn）甲酸為（wéi）唯一碳源的液體培養基並分裝於燒瓶中，滅（miè）菌後將少量的土壤樣品接種於該液體培養基中，培養一定時間，原來透（tòu）明的培養液會變得渾濁，說明（míng）已有（yǒu）大量微生物生長（zhǎng）。取少量上述培養液轉移至新鮮培（péi）養（yǎng）液中重新培養，該過程經數次重複後能（néng）利用對羥（qiǎng）基苯（běn）甲酸的微（wēi）生（shēng）物的比例在（zài）培養物中將大大提高，將培養液塗布於（yú）以對羥基苯甲酸為唯一碳源的瓊（qióng）脂（zhī）平板，得到的微生物菌落中的大部分都是能降解對羥基苯甲酸的微生物。挑取一部分單菌落分別接種到含有及缺乏（fá）對羥基苯甲（jiǎ）酸的液體培養基中進行培養，其中大部分在含有對羥基苯甲酸的培（péi）養基中生長，而在沒（méi）有（yǒu）對羥基苯甲酸的培養基中表現為沒有生長，說明（míng）通過該富（fù）集程序的確得到了欲分離的目標微生物。通過富集培養使原本（běn）在（zài）自然環境中（zhōng）占少數的微生物的數量（liàng）大大提高後，可以再通（tōng）過稀釋倒平板或平板劃線等操作得到純培養物。
富集培（péi）養是微生物學家最強有力的技術手段之一。營養和生理條件的幾乎無窮盡（jìn）的組（zǔ）合形式可應用於從自然界（jiè）選擇出特定微生物（wù）的需要。富集培養方法提供了按照意願從自然（rán）界分離出特定已知微生物種類的有力手段，隻要掌握這種微生物的特殊要求就行。富集培養法也可用（yòng）來分離（lí）培養出由科學家設計的特定環境中能生長的（de）微生物，盡管17C一起草並不知道什麽微生物能在這種特定的環（huán）境中生長（zhǎng）。
（五）、二元培養物
分（fèn）離的目的通常是要得到純培（péi）養。然而（ér），在有些（xiē）情況下這是做不到的（de）或是很難作（zuò）到的。但可用二元培養物作為純化培養的替代物。隻有一種微（wēi）生物的培養物稱為純培養物，含有二種以上微生物的培養物稱為混合培養物，而如果培養物中隻含有二種（zhǒng）微（wēi）生物，而且是有意（yì）識的保持二者之間的特定關係的培養物稱為二元培養（yǎng）物。例如二元培養物是保存（cún）病毒的（de）最有效途徑，因為病毒是細胞（bāo）生物的嚴格的細胞內寄生物。有一些具有細胞的微生物也是嚴格的其它生（shēng）物的細胞內寄生物，或特殊的共生關（guān）係。對於這些生物，二元（yuán）培養物是在實驗室控製（zhì）條件下可能達到的最接近於純培養的培養方法。
在（zài）自然環境中，獵食細小微生物的原生動物也很容易用二元培養法在實驗室（shì）培養，培養物由原生動物和（hé）它獵食的微生物二（èr）者組成。例如，纖毛蟲、變形蟲和粘菌。對這些生物，二者的關係可能並不是嚴格的。這些生物中有些能夠純培養（yǎng），但是其營養要求往往極端複雜，製備純培養的培（péi）養基很困難、很費事。
二、微生物生長量的測定（dìng）
微生（shēng）物學研究中常常要進行微生物生長（zhǎng）量（liàng）的測定，有多種方法用於微生物生（shēng）長量的（de）測定，概括起來常用的有以下幾（jǐ）種：
（一）直接計數法 ( 又（yòu）稱全數法 )
1 、計數器直接測數法
取定量稀釋的（de）單細胞培養物懸（xuán）液放（fàng）置在血球計數板 ( 細胞個體形態較大（dà）的單細胞微（wēi）生物（wù），如酵母菌等 ) 或細（xì）菌（jun1）計數（shù）板 ( 適用於細胞個體形態較小的細菌 ) 上，在顯微鏡下計數一定體積（jī）中的平均細（xì）胞數，換算出供測樣品的（de）細胞數。
（ 1 ）血球計數板及（jí）細胞（bāo）計數
血（xuè）球計數板是一種在特（tè）定平麵上劃有格子的特殊載片。在劃有格子的區域中，有（yǒu）分別用雙（shuāng）線（xiàn）和單（dān）線分隔（gé）而成的方格。其中有以雙線為界劃成的方格 25( 或 16) 格，這種以雙線為界的格子稱為中格，其內有以單線為界的 16 （或 25 ）小格。因此，用於細胞計數的區域的總（zǒng）小格數為：25×16 = 400 。該 400 個小格排成（chéng）一正方形的大方格，此大方格的每條邊的邊長為 1 mm ，故 400 個小格的總麵積為 1mm^２。
在進行細胞計數（shù）前，先取蓋玻片蓋於計數方格之上，蓋玻片的下平麵與刻有方格的血球計數板平麵之間留有0.1mm 高度的空隙。含（hán）有（yǒu）細胞的供測樣品液被加注在（zài）此空隙中。加注在 400 個小格（ 1mm^２ ）之上與蓋玻片之間（jiān）的空隙中的液體總體積應為：1.0mm×1.0mm×0.1mm = 0 . 1mm^３
一般表示樣品細胞濃（nóng）度的（de）單位為：億個 / mL 。因此，在計（jì）數後，獲得在 400 個小（xiǎo）格中的細胞總數，再乘以 10 ^４ ，以（yǐ）換算成每 mL 所含細胞數。其計算（suàn）公式如下：
菌液的含菌數 /mL = 每小格平均菌數× 400 × 10 000 ×稀釋倍數
在進行具體操作時，一（yī）般（bān）取五個中格進行（háng）計數，取格的方法一般有兩種：① 取計數板斜角線相連（lián）的（de） 5 個中格；② 取計數板 4 個（gè）角上的 4 個（gè）中格和計數（shù）板正中央的 1 個中格。對橫跨位於方格邊線上的細胞，在計數時，隻計（jì）一個方格 4 條邊中的（de） 2 條邊（biān）線上的細胞，而另兩條邊（biān）線上的細胞則不計；取邊的原則（zé）是（shì）每個方格均取上邊（biān）線與右邊線（xiàn）或下（xià）邊線與左邊線。

圖 3 — 5 血球計數板方格示意圖
（ 2 ）細菌（jun1）計數板及細胞計數
細菌計數板與血球計數板結構大同小異，隻是刻有格子的計數板平麵與蓋（gài）玻（bō）片（piàn）之間的空隙高度僅0.02mm 。因此，計算方法稍有（yǒu）差異（見以下計算公式），餘者與血球計數板法同。
菌液樣本（běn）的含菌數 /mL = 每（měi）小格平均（jun1）菌數× 400 × 50 000 ×稀釋（shì）倍數
2 、塗（tú）片染色計數
用計數板附帶的 0.01mL 吸管，吸取定量稀釋的細菌懸（xuán）液，放置刻有 1 cm ^２ 麵積的玻片上，使（shǐ）菌液均勻地（dì）塗布在 1cm ^２麵積（jī）上，固定後染色，在顯微鏡下（xià）任意選擇幾（jǐ）個乃至十幾個視（shì）野來計（jì）算細（xì）胞數量。根據計算出的視野麵積核算出每（měi） 1cm ^２中的菌數（shù），然後按 1cm ^２麵積上的菌（jun1）液量（liàng）和稀釋度，計算每 mL 原液中（zhōng）的含菌（jun1）數。
原（yuán）菌液的含菌數 /mL = 視（shì）野中的平均菌數× 1cm^２/ 視野麵積× 100 ×稀釋倍數
3 、比濁法
這是測定菌懸液中細胞數量的快（kuài）速方法。其原理是菌懸液中的單細胞微生物，其細胞濃度與混濁度成（chéng）正比，與透光度（dù）成反比。細胞越多（duō），濁度越大，透光量越少（shǎo）。因此，測定菌懸液的（de）光密度 ( 或透光度（dù） ) 或濁（zhuó）度可以反映細（xì）胞的濃度。將未知細胞（bāo）數的（de）懸液與已知細胞數的菌懸液相比，求出未知菌（jun1）懸液所含（hán）的細胞數。濁（zhuó）度計、分光光度儀是測定菌懸液細胞濃度的常用儀器。此法比較簡便（biàn），但使用有局限性（xìng）。菌（jun1）懸液顏色不宜太深，不能混雜其他物質，否則不能獲得正確結果（guǒ）。一般在用此法測定細胞濃度時（shí），應先用計數法作對應計數，取得經驗數據，並製（zhì）作菌（jun1）數對 OD 值的標準曲線方便查獲菌數值（zhí）。
（二）活菌計數（shù）法 ( 又叫間接計數法 )
活菌（jun1）計數法又稱間接計數法 。直接計數法測定到的是（shì）死、活細（xì）胞總數，而間接計數法測得（dé）的僅是（shì）活菌數。這類方法所得的數值往往比（bǐ）直接計數（shù）法測得（dé）的數值小。
1 、平板菌落計數
此法是基（jī）於每一個分散的（de）活細胞（bāo）在適宜的培（péi）養基中具有生長（zhǎng）繁殖並能形成一個菌落的能力；因（yīn）此，菌落數就是待測樣品所含的活菌數。
將單細胞微生物待測（cè）液經（jīng） 10 倍係列稀釋後，將一（yī）定濃度的稀釋液定量地（dì）接種到瓊脂平（píng）板培養基上培養，長出的菌落數就是稀釋液中含有的活細胞數，可以計算出供測樣（yàng）品中的活細胞數。但應注意，由於各種原因，平板上的單個（gè）菌落可能並不是由一個菌體細胞形成（chéng）的，因此在表達單位樣品含（hán）菌數時，可用（yòng）單位樣品中形成（chéng）菌落單位來表示，即 CFU ／ mL 或 CFU ／ g(CFU 即 colony-forming unit) 。
2 、液體稀釋最大或（huò）然數法測數
取定量（ 1mL ）的單細胞微生物懸液，用培養液（yè）作（zuò）定量 10 倍係列稀釋，重複（fù） 3－5 次，將不同稀釋度的係列稀釋管置適宜溫度（dù）下培養。在稀釋度合適（shì）的前提下，在菌濃度相對較高的稀釋管（guǎn）內均出現菌生長，而自某個（gè）稀釋度較高的稀釋管開始至稀釋度更高的稀釋管中均不出現菌生長，按稀釋度自低到高的順序（xù），把最後（hòu）三個稀釋度相（xiàng）對較高（gāo）的、出現菌（jun1）生長的（de）稀釋管之稀釋度稱為臨界級數。由 3 至（zhì） 5 次重複的連續三級臨界級數獲得指數，查相應（yīng）重複的最大或然數 ( 即 most probable number ， MPN) 表求得最大（dà）可能數，再乘（chéng）以出（chū）現生長的臨界級數的最低稀釋度，即可測得比較可靠的（de）樣（yàng）品活菌濃度。
在（zài）實踐中，通常以5管重複為一個（gè）組，故這裏僅列（liè）出5次重複測數統（tǒng）計表。隻要知道了數量（liàng）指標，就可查知近似值。
3 薄膜（mó）過濾計（jì）數法
測定水與空氣中的活菌數量時（shí），由（yóu）於含菌濃度（dù）低，則使用（yòng）微生物限度檢測儀（yí）可先將（jiāng）待測樣品 ( 一（yī）定體積的水或空氣 ) 通（tōng）過（guò）微孔薄膜 ( 如硝化纖維薄（báo）膜 ) 過濾濃縮，然（rán）後把濾膜放在（zài）適當的固體培養基上培養，長出菌落後即可計數。
（三）細胞物質量測定法
1 、幹重法
集菌儀（yí）過（guò）濾定量（liàng）培養物用離心或過濾的方法將菌體從培養基中分離出來，洗（xǐ）淨、經常壓或真空幹燥，幹燥溫度常采用105℃、100℃或紅外線烘幹至恒重，也可在較（jiào）低溫度（80℃或40℃）下真空幹燥，然（rán）後精確稱重，即可計算出培養物的總生物量（liàng）。過濾時（shí）絲狀真菌用濾（lǜ）紙過濾 ，細菌（jun1）用（yòng）醋酸纖維膜（mó）等進行過濾。一般（bān）細菌幹重約為濕重的 20 ％ ～ 25 ％。此法直接而（ér）又可靠，但要求測定（dìng）時菌體濃度較高（gāo），樣品（pǐn）中不含非菌體的幹物質。
2 、含氮量測定法
細胞的蛋白質含量是比（bǐ）較穩定的，可以從蛋（dàn）白質含量的測定求出細胞（bāo）物（wù）質量。已知（zhī）細菌細胞幹重的含氮量一般為12%～15％，酵（jiào）母菌為7.5％，黴菌為6.0％。一般（bān）細菌的含氮量約為原生質幹重的 14 ％。而總氮量與細胞（bāo）蛋白質總含（hán）量的關（guān）係可用下式計算：
蛋白質總量 = 含氮量百分比× 6.25
3 、DNA 測（cè）定法
這種方法是基於 DNA 與 DABA — 2HCl( 即新配（pèi）製的 20 ％ W ／ W ， 3,5 —二氨基苯甲酸 - 鹽酸溶液（yè） ) 結合能顯示特殊熒光（guāng）反應的原理，定量測定培養物的菌懸液的熒光反應強度，求得 DNA 的含（hán）量，可以直接反映所含細（xì）胞物質的（de）量（liàng）。同（tóng）時還可根據 DNA 含（hán）量計算出細菌的數量。每個細菌平均（jun1）含 8.4 × 10 ^－５ng DNA 。
4 、其他生理指標測定法
微生物新陳代謝的結果，必（bì）然要消耗或產生一定量的物質。因此也可以用某物質的消耗量或某產物的形成量來表示微生物的生長（zhǎng）量。例如通過測定（dìng）微生物對氧的吸收、發（fā）酵糖產酸量或 CO_２的釋放量，均（jun1）可用來作為生長指標。使用這一方（fāng）法時，必（bì）須注意作為生長指標的那些生理活動，應不受外界其他因素的影響或幹擾，以（yǐ）便獲得準確的結果。
從上表中可以看出，每種方法都各有優點和局限性。隻有在考慮了這些因素同需要著手解決的問題之間的關係以後，才能對具體（tǐ）的方（fāng）法進行選擇。正如前麵（miàn）說過的，平皿菌（jun1）落計（jì）數法是微生（shēng）物（wù）學中應用最多的常規方法，掌握這一方法的原理和實際操（cāo）作，很有必要。此（cǐ）法在理論上（shàng）能反（fǎn）映活菌數。另外當用兩種不同的方法測量（liàng）細（xì）菌的生長量時，其結果不一致（zhì）是完全（quán）可能（néng）的。
測定微生物（wù）的生（shēng）長量，在理論和實踐上都十分重要。當17C一起草要對細菌在不同培養基中或不同條件下的生長情況進行評價或解釋時，就（jiù）必須用數量來表示它的生長。例如可以通（tōng）過細菌生長的快慢來判（pàn）斷某一條件是否適合。生長快的細胞，最終的總收獲量可能沒（méi）有另一些條件下的收獲量大。在另一些條件下，生長速率雖然較低，但它卻可在一段（duàn）時間內不斷增加（jiā）。因此，隻有具（jù）備了有關生（shēng）長的定量知識，才能在實際應用中作出正確的選（xuǎn）擇，以利於科研和生產（chǎn）活動的進一步開展。