上海秉越電子儀器有限公司

微生物限度儀是藥品、食品、化妝品等領域質量控製中用於檢測微生物汙染（rǎn）程度（dù）的關鍵設備，其校準的（de）準確性（xìng）直接關係到檢測數據的可靠性。

以下是關於微生物限度儀校準方式（shì）的係統性描述（shù），涵蓋校準原理、操作步驟、驗證方法及注意事項（xiàng）。

一、校準目的與依據 　　微生物（wù）限（xiàn）度儀的校準旨在確保儀器滿足以下技術要求：

1. 過濾係統性能：濾膜完整性、過濾速率及壓力控製符（fú）合標準。

2. 培養條件穩定性：溫度、濕度、氣體環境等參數準確（què）可控。

3. 計數準確性：菌落計數（shù）與標準菌株的回收率符（fú）合藥典要求。

4. 重複（fù）性與線性：多次檢測結果的（de）偏差在允許範圍（wéi）內。 　　校準依據包括《中國藥典》(ChP)、《美（měi）國藥典》(USP)、ISO 11133係列（liè）標準（zhǔn）以及（jí）儀器製造商的技術規範。

二、校準前準備

1. 環境（jìng）條件

- 校準（zhǔn）需在（zài）潔淨（jìng）環境(如C級（jí）潔淨（jìng）區)中進行，避免微（wēi）生物汙染幹擾。

- 溫（wēn）濕度（dù）應控製在常溫(20-25℃)、濕度≤60%(防止濾膜受潮)。

2. 標準物質與工具

- 標（biāo）準（zhǔn）菌株：如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Candida albicans)等，用於（yú）挑戰試驗。

- 儀器工具：壓力計(精度±0.5 kPa)、流量計(精度±1 mL/min)、溫度計(±0.1℃)、顯微鏡(100倍放大)等。

- 驗證用濾膜：孔徑0.45 μm或1.0 μm(根據用途選擇)，需（xū）預先滅菌處（chù）理。

3. 儀器（qì）狀態檢查

- 清（qīng）潔過濾裝置、培養艙及管路，確保無殘留物或（huò）堵塞。

- 檢查（chá）電源、氣壓源、溫控係統等基（jī）礎功能正常。

三、核心（xīn）校準項目與步驟

1. 過濾係統校準

- 濾膜完整性測試

- 氣泡法：將濾膜浸入水中，通入壓（yā）縮空氣，觀察濾膜表麵是否均勻產生氣泡。無連續（xù）氣泡視為合格。

- 壓力保持法（fǎ）：向濾膜施加標準壓力(如20 kPa)，保（bǎo）持30秒，壓力下降不超過5%為合（hé）格。

- 微生物挑戰法：使用枯草芽孢杆菌懸液(約1×10⁶ CFU/mL)，過濾後培養，濾膜背麵無菌落生長則完整性合格。

- 過濾速率與（yǔ）壓力校準

- 設定不同壓力值(如10 kPa、20 kPa)，測定500 mL標準菌液(如大（dà）腸埃希菌懸液，1×10³ CFU/mL)的過濾時間。

- 對比實際過濾時間與儀器標稱值，偏差應≤10%。 　　- 記錄壓力-流量曲線，確保線性關（guān）係符合儀器設計參（cān）數。

2. 培養條件校準

- 溫度均勻性驗證

- 在培養艙（cāng）內放置至（zhì）少3個溫度探頭(上、中、下位置)，設置37℃(細（xì）菌培養（yǎng）)或25℃(黴菌培養（yǎng）)，穩定後各點溫差應≤0.5℃。

- 使用恒溫培養箱作為對照，確保儀器溫控（kòng）係統無偏差。

- 濕度與氣體（tǐ）環境控製

- 對於需厭氧（yǎng）條件的（de）培養，需驗證氮氣或二氧化碳的流量(如10-20 mL/min)，並通過厭氧指示劑(如亞甲藍)確認無氧環境。

- 濕度控製可通過放置幹燥劑或加濕裝置，目（mù）標濕（shī）度範圍為50-70%。 　　3. 計數準確性驗證

- 標（biāo）準菌株回收率試驗

- 製備已知濃度的標準菌液(如枯草芽孢杆菌，10-100 CFU/mL)，按儀器（qì）程序過濾並培養（yǎng）。

- 計算回收率（lǜ）：回收率 = (實際CFU / 理論（lùn）CFU) × 100%，需（xū）達到50%-200%(參考ChP要求)。

- 平行測試6次，計算相對標準偏差(RSD)，要求RSD ≤20%。

- 陰性對照（zhào）與空白驗證

- 使用無菌生理（lǐ）鹽水代替菌液，過濾後（hòu）培養，陰性對照組應無微生物生長。

- 檢查濾膜（mó）本身無菌落，排（pái）除假陽性幹擾。

4. 重複性與線性驗證

- 重複性測試

- 同一批次菌液(如黑曲黴懸液，濃度1×10² CFU/mL)重複過濾6次，計算CFU的RSD，要求≤15%。

- 不同操作人員測試同一樣品，結果偏差（chà）應≤10%。

- 線（xiàn）性範（fàn）圍驗證

- 製備梯度濃度菌液(如10¹-10⁴ CFU/mL)，過濾後計數，繪製（zhì）CFU-濃度曲線。

- 線性相關係數(R²)應≥0.98，表明（míng）儀器在量程（chéng）內響應良好。

四、校準周期與記錄

- 校（xiào）準頻率（lǜ）：建議每年至少校準一次，或在以下情況後重新校準：

- 儀器維修、關鍵部（bù）件更換(如濾膜夾具、壓力傳感（gǎn）器（qì）)。

- 檢測數據異（yì）常波動或不符合曆史趨（qū）勢。

- 實驗室搬遷或環境條件重大變化。

- 記（jì）錄與證書

- 詳細記（jì）錄校準數據、使用的標定設備、操作人員及（jí）結論。

- 出具校準證書，標明儀器編號、有效期及符合（hé）的標（biāo）準(如ChP、ISO)。

五、常見故障與（yǔ）應（yīng）對措施

1. 濾速異常

- 原（yuán）因：濾膜堵塞、壓力傳感器（qì）失靈（líng）、管路泄漏。

- 解決：更換濾膜（mó），校準（zhǔn）壓力計，檢查（chá）氣密性。

2. 溫度偏差過大

- 原因：加熱模塊老化（huà）、溫控（kòng）探頭位置偏移。

- 解決：調整探頭位置，更（gèng）換加熱元件。

3. 回收率偏低

- 原（yuán）因：濾膜吸附微（wēi）生物、培養時間不足。

- 解決：改用低吸附濾膜(如混合纖維（wéi）素酯膜)，延長培養時間至72小時。